本研究旨在构建并筛选干扰效率高的奶牛NR1D1基因慢病毒干扰载体，以探究生物钟核受体NR1D1在大肠杆菌脂多糖（LPS）诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞（BEND）炎性反应中的作用。使用1μg/mL LPS处理BEND 12 h建立炎性反应模型，qPCR检测炎症因子与生物钟基因的表达变化；设计2对靶向奶牛NR1D1基因的特异性短发夹RNA(shRNA)序列和1对无义序列，退火后分别连接至pCD513B-U6载体构建3个重组质粒，随后进行酶切和测序鉴定。将酶切测序鉴定均无误的重组质粒与辅助质粒共转染至HEK293T细胞包装慢病毒，获得病毒颗粒后用其感染BEND,2μg/mL嘌呤霉素筛选获得稳定表达细胞系并使用qPCR和WB鉴定干扰效率。LPS处理NR1D1敲低组与对照组BEND细胞，采用qPCR技术检测炎症因子IL-6、IL-8、IL-1βmRNA的表达变化。结果表明：LPS处理BEND后，IL-6、IL-8、IL-1β等炎症因子显著升高，表明BEND炎性反应模型构建成功。同时，LPS处理后，生物钟核受体NR1D1 mRNA表达量显著升高，提示其可能参与BEND炎性反应的调控；成功构建2个NR...