试验旨在探究短乳杆菌R33对苜蓿半干青贮的营养成分、发酵品质和微生物群落的影响，以提高苜蓿半干青贮品质。试验采用单因素完全随机设计，短乳杆菌（活菌数1×109 CFU/mL）添加水平分别为苜蓿鲜重的1%(T1%)和5%(T5%)，同时设置不加菌对照组和仅加无菌培养基对照组，室温青贮30 d后取样分析。结果表明：添加短乳杆菌R33可降低苜蓿青贮的pH和总碳量（P<0.05），提高粗蛋白质、乳酸和丙酸含量（P<0.05），但对干物质、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量无影响（P>0.05）；添加短乳杆菌后改变了微生物群落组成（P<0.05），降低了菌群多样性（P<0.05）；在门水平上，使厚壁菌门（Firmicutes）相对丰度升高，变形菌门（Proteobacteria）相对丰度降低；在属水平上，添加短乳杆菌后乳杆菌属（Lactobacillus）占比均超过95%。因此，添加短乳杆菌R33可以改善半干苜蓿青贮发酵品质，促进有益微生物增殖，提高苜蓿青贮品质。