为探究山羊原代软骨细胞的体外分离培养和鉴定方法，本实验采用胰蛋白酶与Ⅱ型胶原酶相结合的消化方法分离山羊原代软骨细胞。使用倒置显微镜观察并拍摄1、3、5、7 d共4个时期的细胞形态；利用血球计数板对细胞计数并绘制生长曲线；RT-qPCR法检测山羊软骨细胞标志性基因；通过甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫荧光染色法对软骨细胞进行鉴定。结果显示：细胞形态由透亮的圆点逐渐变为三角形、短梭形等形态，最终转变为体积较大，形态圆润的多边形；细胞计数结果显示，1～7 d细胞数量逐渐增加，7 d达到峰值，7～11d细胞数量逐渐减少。Acan和Col Ⅱ基因mRNA相对表达量随细胞培养时间的延长而降低，MMP13基因mRNA相对表达量逐渐升高。甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色结果均为阳性。由以上结果可知，本实验成功获得大量活力良好的山羊软骨细胞，并建立山羊软骨细胞体外分离及培养的方法，为进一步研究山羊软骨相关体外试验提供参考。