奶牛乳房炎的防治对提升奶牛养殖效益和保障乳制品安全至关重要。为探究仙人掌防治奶牛乳房炎的作用机制，本研究采用网络药理学和分子对接技术，在TCMSP和HERB数据库查找仙人掌成分，选择OB≥30%、DL≥0.18及Swiss ADME筛选符合类药性五原则的成分，使用Swiss Target Prediction数据库预测靶点，奶牛乳房炎的靶点从OMIM、NCBI、DisGeNET及GeneCards基因数据库获取，取二者交集，得到仙人掌防治奶牛乳房炎疾病的关键靶点；构建成分-交集靶点网络筛选核心成分，根据蛋白互作结果筛选出核心靶点；交集靶点通过DAVID数据库进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析；核心成分和核心靶点进行分子对接验证。结果显示：仙人掌成分包括仙人掌醇、桑色素、山柰酚、（-）-儿茶素、2-苯乙酰胺、原儿茶酸、3,4-二羟基苯甲酸乙酯、3'-O-甲基儿茶素等35个，对应764个相关靶点；奶牛乳房炎疾病靶点1 244个，交集基因共106个。仙人掌核心成分包括仙人掌醇、桑色素、山柰酚、橙皮苷、原儿茶酸、3-O-甲基槲皮素等；核心靶点包含CASP3、IL6、SRC、TP53、STAT3等。GO富集分析，获得了130个生物过程、36个细胞组成以及48个分子功能（P<0.05）;KEGG富集分析得到56条相关通路（P<0.05），涉及癌症相关通路、PI3K/AKT信号通路、脂质与动脉粥样硬化通路等。分子对接显示核心成分与核心靶点具有良好的结合活性。本研究发现仙人掌可通过多种成分作用于多个靶点，调控多条信号通路来发挥治疗奶牛乳房炎，为仙人掌防治奶牛乳房炎的研究提供理论依据。