本研究旨在探究跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS12基因的遗传变异位点对猪精子活力的影响，并通过功能研究鉴定影响猪精子活力的关键分子标记。通过PCR测序检测大白公猪群体TMPRSS12基因的所有遗传变异位点，并与精子活力表型进行关联分析。选择重要SNP位点分别构建TMPRSS12基因野生型和突变型质粒，瞬时转入293T细胞，测定双荧光素酶活性。最后利用qPCR和WB分别验证突变位点对精子中TMPRSS12的mRNA和蛋白表达的影响。结果显示TMPRSS12基因启动子区和外显子共存在6个遗传变异位点，包括Chr5:16698781＿16698782(ins CC)、Chr5:16698793(T>C)、Chr5:16698854(G>A)、Chr5:16698867(T>G)、Chr5:16698913(T>C)和Chr5:16699062(A>C)。其中，启动子区的CC插入位点（Chr5:16698781＿16698782）与猪精子活力极显著相关，Chr5:16698793(T>C)和Chr5:16698854(T>G)与猪精子活力显著相关。双荧光素酶试验结果显示CC插入位点突变型质粒转染组双荧光素酶活性显著下降，且qPCR和WB结果表明CC插入型个体精子中TMPRSS12表达显著降低。本研究挖掘到TMPRSS12基因的Chr5:16698781＿16698782(ins CC)位点与公猪精子活力极显著相关，且该突变位点显著降低精子中TMPRSS12的mRNA和蛋白表达，从而影响精子活力和功能。研究结果为公猪精液品质性状的遗传改良提供了有价值的分子标记。