猪背膘厚度与肌内脂肪（IMF）协同调控是肉品质遗传改良与生产提质增效的关键。为探究猪肌内脂肪和皮下脂肪形成的分子差异，本研究以体外诱导分化的猪前体脂肪细胞为研究模型，通过转录组测序技术解析肌内与皮下脂肪细胞诱导分化前后基因表达的动态特征。选取3日龄健康仔猪背最长肌与皮下脂肪组织，分别分离前体脂肪细胞，设置诱导分化0、4、8 d 3个关键时间点进行转录组测序。结果显示：2种细胞诱导分化同期比较差异表达基因数量在诱导4 d时最多，共筛选到2 086个差异表达基因，表明4 d可能为分化差异形成的重要节点；进一步筛选获得460个肌内脂肪细胞特异性、600个皮下脂肪细胞特异性及384个共同调控差异表达基因（DEGs），在384个共同调控DEGs中筛选到了GPC3、CILP2、NRCAM、AWN 4个在2种脂肪细胞分化过程中上下调相反的DEGs。GO和KEGG富集分析表明，肌内脂肪细胞特异性DEGs主要富集于细胞周期相关通路，皮下脂肪细胞特异性DEGs则显著富集于脂质代谢和MAPK信号通路；共同调控的DEGs主要参与PPAR信号通路等。RT-qPCR验证结果与转录组测序数据一致性良好。本研究结果表明，猪肌内与皮下脂肪细胞在成脂分化过程中存在显著分子差异，诱导分化中期可能为差异形成关键节点，存在大量差异表达基因，其中GPC3、CILP2、NRCAM、AWN 4个差异候选基因在2类细胞中呈现相反的上调、下调表达趋势。