本研究建立了酵母培养物（Yeast Culture,YC）中甘露糖、葡萄糖和半乳糖3种主要水解单糖的高效液相色谱检测方法，并基于此，改进了YC中酵母细胞壁多糖含量的评估方法。YC试样与10%盐酸充分混匀，经高压灭菌锅121℃水解20 min，或耐压水解管98℃水解60 min；水解液经中和后，碱性条件下用5-甲基-2-苯基-1,2-二氢吡唑-3-酮（PMP）进行衍生，以0.02 mol/L乙酸铵（A）和乙腈（B）为流动相，C18(5μm,250 mm×4.6 mm)柱梯度分离，紫外检测器检测（250 nm），外标法定量；依校正后的水解单糖检测结果，对YC中酵母细胞壁多糖含量进行评估。结果显示，试验确定的水解条件下，3种水解单糖稳定，水解完全；在考察的浓度范围内，各水解单糖线性良好，R2均大于0.999 5；方法加标回收率为93.07%～105.4%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation,RSD）为1.90%～6.52%；单糖衍生物在考察的96 h内，保持稳定。实际YC样品和原料的水解单糖检测表明，基于酵母细胞水解甘露糖、葡萄糖的含量比值和原料中水解甘露糖、半乳糖的含量比值，可更准确地评估YC中来自酵母细胞壁的活性多糖—甘露聚糖和β-葡聚糖的含量。该方法为YC产品质量控制、检测和评价，提供了有效的技术支持。