本试验基于网络药理学、分子对接技术和细胞实验探究黄连抑制奶牛乳腺炎的作用机制。通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）数据库筛选出黄连11种活性成分及152个靶点，结合疾病相关基因数据库（GeneCards）和在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）获取的2 537个乳腺炎靶点，经韦恩（Venn）平台分析得到31个共同靶点，蛋白质互作（PPI）网络分析得到10个核心靶点，基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析表明，这些靶点显著富集于“免疫反应”、“细胞对脂多糖应答”等生物过程，其中白细胞介素-17(IL-17)信号通路是关键通路。分子对接证实黄连活性成分与核心靶点结合能均低于-20 930 J/mol。体外实验中，细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定黄连提取物（0、20、40、80、100、200μg/mL）对奶牛乳腺上皮细胞（MAC-T）的影响，筛选出最佳干预浓度（40μg/mL）与时间（12 h），通过脂多糖（LPS）诱导MAC-T细胞构建炎症模型，设空白对照组、LPS模型组及黄连干预组。逆转录-聚合酶链式反应（RT-qPCR）显示：黄连下调促炎因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及IL-17信号通路相关基因白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-17受体A(IL-17RA)、NF-κB激活因子1(Act1)、TNF受体相关因子6(TRAF6)水平（P<0.05），同时上调抑炎因子IL-10水平（P<0.05）。结果表明，黄连通过抑制IL-17信号通路抑制奶牛乳腺炎症反应，为奶牛乳腺炎的非抗生素治疗提供新依据。