本研究旨在制备并验证针对番鸭FGF5蛋白的特异性多克隆抗体，为其在细胞水平的表达检测与功能研究提供可靠的实验工具。以黑羽番鸭卵巢组织cDNA为模板，构建重组真核表达载体pCAGGS-FGF5和干扰载体shRNA-FGF5。通过生物信息学分析筛选FGF5蛋白155～274位氨基酸区域作为免疫原片段，构建原核表达载体pET30a-FGF5，表达并纯化重组蛋白，用于免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。通过ELISA、Western Blot及间接免疫荧光技术评估抗体的效价和特异性。结果显示，pET30a-FGF5经诱导表达与纯化后获得高质量重组蛋白，所得抗体效价达1:102 400;Western Blot在约30 kDa处可检测到清晰的特异性条带；在卵巢颗粒细胞中过表达或干扰FGF5基因后，制备的FGF5多克隆抗体能灵敏识别不同表达水平的FGF5蛋白，亚细胞定位显示其在颗粒细胞中呈核-质双重分布。综上，本研究成功制备了具有高效价与良好特异性的番鸭FGF5多克隆抗体，为深入探究其在水禽卵巢发育及繁殖调控中的作用提供了关键实验基础与理论支撑。