为探索呕吐毒素（Deoxynivalenol,DON）对鸡肠黏膜上皮细胞（Intestinal Epithelial Cells,IECs）活性与自噬的影响，本试验选用15胚龄鸡胚，分别用胰蛋白酶、胶原酶I、胶原酶I与透明质酸酶联合消化法分离IECs，确定最佳分离方法，并分别用不同浓度的DON处理细胞，分组如下：对照组、0.5μg/mL组、1μg/mL组、2μg/mL组、4μg/mL组，进行细胞活性及自噬相关因子的检测。结果显示：胶原酶I和透明质酸酶联合消化法活细胞比率显著高于胰蛋白酶消化法，胶原酶I、胶原酶I和透明质酸酶联合消化后培养的IECs纯度高，二者差异不显著，但均显著高于胰蛋白酶消化法。与0.5μg/mL组相比，1、2、4μg/mL组细胞活性降低（P<0.05）；与2μg/mL组相比，4μg/mL组细胞活性降低（P<0.05）。自噬因子检测结果显示，与对照组相比，1μg/mL组、2μg/mL组mTOR含量减少（P<0.05）,2μg/mL组p62含量减少（P<0.05）；与1μg/mL组相比，2μg/mL组mTOR含量降低（P<0.05）。说明胶原酶I与透明质酸酶联合消化法分离IECs优于单一酶消化法，能获得纯度高、活性好的IECs；不同剂量的DON能引起鸡IECs自噬因子变化，诱导自噬发生。