EYA3是哺乳动物发情调控的关键上游因子，前期研究发现在不同光周期条件下EYA3基因表达存在显著差异，但具体调控机制不明。miRNA在哺乳动物繁殖相关通路中发挥重要作用，本文采用分子生物学方法旨在探究miR-370-3p与EYA3的靶向关系及其对EYA3表达的影响，为进一步研究miRNA对EYA3基因表达的调控机制提供依据。以团队前期转录组测序分析中筛选出的EYA3基因为研究对象，构建EYA33'UTR野生型和突变型载体，在293T细胞中共转染miR-370-3p mimics和EYA3野生型、突变型及阴性对照，采用双荧光素酶报告基因检测系统确定了miR-370-3p与EYA3的靶向性关系；在mRNA水平上发现了miR-370-3p能够抑制EYA3基因表达。综上，miR-370-3p可直接靶向EYA3的3'UTR区域，并可能通过调控EYA3表达水平的方式，参与绵羊的光周期响应和季节性发情调控。