CRISPR/Cas9基因编辑技术因其操作简便、高效和准确等优势，成为最流行的基因编辑技术之一，在畜禽遗传改良领域得到广泛应用。CRISPR/Cas9文库筛选技术作为新一代基因编辑技术，在解决畜禽育种、疾病控制等方面都有诸多应用，特别是在猪、牛、羊、鸡等畜禽的遗传育种和疾病防治研究中展现出巨大潜力。通过CRISPR/Cas9文库筛选，能够筛选出与多种病毒及病原体相关的抗性基因，同时挖掘出控制畜禽生长速度、肉质品质等重要性状的关键因子。本文介绍了CRISPR/Cas9文库筛选技术的基本原理及方法流程，综述了CRISPR/Cas9文库筛选技术对猪、牛、羊、鸡等畜禽在遗传改良、疾病防控方面的研究进展，以期为今后深入挖掘CRISPR/Cas9文库筛选技术的应用价值提供参考。