试验旨在研究不同信号通路及表观遗传相关化学分子组合对绵羊胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)多能性状态的影响,以期获得多能性层级更高的绵羊ESCs细胞系。本研究以实验室前期构建的绵羊ESCs细胞系为材料,以前期优化的2i-LA(IWR-1、LIF、Activin A、VC和PD0325901)培养体系为基础,通过补充添加与表观遗传修饰和甲基化状态相关的12个化学分子组合,最终筛选获得了最优的培养条件2iLA-A3(2i-LA,G9a组蛋白甲基化转移酶抑制剂:A366)。结果表明:2iLA-A3培养条件下,多能性标记基因SOX2、SALL4和原始(Naïve)态标记基因KLF4、DPPA3在mRNA水平的表达量极显著增加。在蛋白水平上,细胞免疫荧光结果显示多能性蛋白标记物OCT4、SOX2、NANOG和细胞表面标记物SSEA4、TRA-1-60、TRA-1-81均正常表达。综上,本研究建立的优化后的2i-LAA3培养条件能够使绵羊ESCs的多能性状态更趋向于Naïve态,研究结果为绵羊干细胞育种奠定了基础。