本研究旨在建立稳定传代的湖川山地猪（渠溪猪）耳缘成纤维细胞系并对其进行生物学特性分析。利用组织块贴壁法分离培养获得渠溪猪耳缘成纤维细胞，通过细胞形态观察、免疫荧光染色、生长曲线测定等对细胞进行鉴定，并比较不同代次细胞（P3、P9、P15）冷冻前后活率和细胞衰老水平。结果表明，体外获得的渠溪猪耳缘成纤维细胞系符合成纤维细胞的基本形态，即细胞呈典型梭形、三角形。经免疫荧光法检测细胞波形蛋白阳性率为98.3%，细胞生长曲线呈“S”型，不同代次细胞（P3、P9、P15）冻前活率均在90%以上，低代次细胞冻前冻后活率差异不显著，表明细胞有良好耐受冷冻性，而高代次细胞解冻后细胞活率下降较为显著，其中第9代、第15代细胞冻后活率分别为89.01%±2.14%、80.43%±0.41%。通过比较第3代、第9代和第15代细胞的生长状态和衰老水平，发现随着传代次数的增加，细胞形态发生变化，增长速度变慢，细胞衰老水平逐渐增加，第9代细胞相比第3代细胞衰老水平平均相对增加了46.17%(P<0.01)，第15代细胞衰老水平平均相对增加了66.83%(P<0.01)。本研究成功建立了湖川山地猪（渠溪猪）耳缘成纤维细胞系，在细胞水平上保存了渠溪猪的遗传资源，为后续开展相关研究提供试验材料和数据支持。