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中国畜牧杂志

中国畜牧杂志  >>  2026 VOL.62  >>   Issue(01)   >>  119-126

遗传育种

长白猪WTAP基因克隆、真核表达载体构建及组织表达规律研究

贾茹茹;王燕新;王云;李思佳;周东平;摆雨薇;余廷姿;石德顺;陆凤花;

作者单位:

1.广西大学动物科学技术学院,亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室2.广西大学动物科学技术学院,广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室

作者简介:

贾茹茹(2000-),女,内蒙古包头人,硕士研究生,主要从事卵母细胞体外成熟与早期胚胎发育研究,E-mail:1341359301@qq.com;

通讯作者:

陆凤花(1973-),女,广西武鸣人,博士,教授,主要从事动物体细胞克隆与繁殖研究,E-mail:lfhgggg@163.com;0

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摘要
闭合
肾母细胞瘤1相关蛋白(Wilms Tumor 1-Associated Protein,WTAP)作为N6-甲基腺嘌呤(N6-methy ladenosine,m6A) RNA甲基化酶复合体的关键组分,在细胞生长发育中发挥重要作用,但其在长白猪中的功能研究尚不清楚。本试验旨在探究WTAP的理化性质、系统进化及其在长白猪各组织中的表达规律。试验以长白猪卵巢组织cDNA为模板,PCR扩增并克隆长白猪WTAP基因的目的片段,利用在线软件对长白猪WTAP蛋白进行生物信息学分析,构建真核表达载体3.1-WTAP-eGFP,并成功转染至猪卵丘细胞。随后使用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测WTAP基因在长白猪心、肝、脾、肺、肾、肠、卵巢、背最长肌中的表达水平。结果显示,长白猪WTAP基因CDS全长序列大小为1 188 bp,共编码395个氨基酸。长白猪WTAP基因氨基酸序列与人的同源性最高,与小鼠的同源性最低。WTAP分子式为C 1862 H 3011 N 557 O 650 S 12 ,属于不稳定性亲水蛋白。长白猪WTAP蛋白二级结构中α-螺旋(47.85%)和无规则卷曲(39.49%)占比较高。构建的真核表达载体3.1-WTAP-eGFP转染至猪卵丘细胞后,与空载体组相比,WTAP基因表达量升高(P<0.05)。RT-qPCR结果表明,WTAP在长白猪各组织中均有表达,其中在卵巢的表达量最高,在肺的表达量最低。本研究成功克隆了长白猪WTAP基因,构建了3.1-WTAP-eGFP真核表达载体,并发现WTAP基因在长白猪卵巢的表达量最高,为深入探究WTAP基因在长白猪繁殖过程中的作用奠定了基础。
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期刊名称:中国畜牧杂志

创办日期:1953年

主管部门:中国科学技术协会

主办单位:中国畜牧兽医学会

刊期:月刊

电话:010-62732723;010-82893431;010-62734608

Email信箱:zgxmzz@cau.edu.cn

国内统一刊号:CN 11-2083/S

国际标准刊号:ISSN 0258-7033