本研究旨在探讨猪精子在超低温（-196℃）冷冻保存过程中转录水平的变化及其对精子功能的影响，为优化冷冻保护剂配方和提高精子冷冻保存质量提供理论依据和潜在靶点。采用计算机辅助精子分析系统（Computer-Assisted Sperm Analysis,CASA）评估新鲜精子和冷冻后复融的精子（简称冷冻精子）活力，同时检测精子质膜完整性、总抗氧化能力、线粒体膜电位、丙二醛（MDA）含量及线粒体活性氧（ROS）水平，并进行转录组测序分析。结果显示：与新鲜精子相比，冷冻处理后的精子总活力、前向运动活力和快速前向运动活力分别由82.58%、74.69%、27.63%显著下降至31.17%、21.95%、8.69%，静止精子比例由15.94%显著升高至68.29%。质膜完整性、总抗氧化能力和高线粒体膜电位比例显著下降，而MDA含量及ROS水平显著升高。转录组分析显示，冷冻精子中有21个基因共同高表达，其中超40%的基因定位于线粒体上，这些基因主要与精子的氧化磷酸化、好氧电子传递链及线粒体ATP合成偶联电子传递等通路相关；而新鲜精子中高表达基因有291个，这些基因较均匀地分布在猪18对常染色体上，...