本研究旨在验证生长分化因子相关血清蛋白1(Growth and Differentiation Factor Associated Serum Protein-1,GASP1)对猪骨骼肌细胞增殖的影响，鉴定ssc-miR-328与WFIKKN2基因结合位点，为探究猪骨骼肌生长发育提供分子依据。双酶切法构建WFIKKN2基因过表达载体，用Hind III和Bam HI限制性内切酶验证；用在线网站miRBase和RNAhybrid预测ssc-miR-328与WFIKKN2基因3'UTR结合位点，构建包含结合位点在内的野生型和突变型载体，用Xho I和Not I限制性内切酶双酶切载体，胶回收产物送至测序，用MegAlign软件进行比对；将ssc-miR-328模拟物分别和野生型、突变型载体共转染至293T细胞，48 h后用酶标仪检测；将过表达、干扰以及ssc-miR-328模拟物用脂质体法分别转染至猪骨骼肌细胞，检测荧光；实时荧光定量PCR检测相关基因的表达情况。琼脂糖凝胶电泳结果显示在1 500 bp～2 000 bp处有清晰单一条带，与目的片段长度相符，证明过表达载体构建成功；在线网站RNAhybrid结果显示ssc-miR-328和WFIKKN2基因3'UTR存在较高的结合度；MegAlign软件比对结果显示野生型和突变型载体构建成功；共转染野生型质粒和ssc-miR-328模拟物组细胞荧光活性极显著低于共转染突变型和ssc-miR-328模拟物组，证明结合位点正确；实时荧光定量结果表明siRNA2的干扰效果最好，可用于后续试验；过表达WFIKKN2基因后其表达量极显著增加，Cyclin D、Cyclin E和PCNA基因表达量也极显著增加；干扰WFIKKN2基因后其表达量极显著降低，Cyclin D、Cyclin E和PCNA基因表达量也极显著降低，转染ssc-miR-328模拟物后WFIKKN2基因表达量极显著降低。初步推测WFIKKN2基因可以促进猪骨骼肌细胞增殖，ssc-miR-328可以与WFIKKN2基因3'UTR结合从而影响其表达情况。本研究为探究骨骼肌生长发育提供了理论基础。