本研究旨在探究猪精浆外泌体miRNAs对精子活力的调控作用，为猪精子质量评价及育种提供分子依据。通过分离鉴定猪精浆外泌体并分析其对精子功能的影响，采用small RNA-seq技术对精浆外泌体和精子中的miRNAs进行表达特征分析与功能注释，筛选出候选miRNAs并验证其生物学功能。结果显示：精子与精浆外泌体共孵育后冷冻保存，可提高冷冻解冻后的精子活力（P<0.01）；精浆外泌体与精子的miRNAs表达模式相似，但存在一定差异，其中ssc-let-7a在外泌体中高度富集且与精子相关生物过程密切相关；功能实验显示，ssc-let-7a的过表达增强了精子活力（P<0.01），而抑制ssc-let-7a的表达则降低精子活力（P<0.05），证实其为调控精子运动能力的关键miRNA。本研究系统揭示了猪精浆外泌体miRNAs对精子功能的调控作用，为优化雄性生育策略提供了新思路。