为研究抗菌肽Stomoxyn在乳酸乳球菌中的高效表达,试验将氯离子诱导型启动子(Chloride-Inducible Promoter,CIP)和经乳酸乳球菌密码子偏好性优化后的抗菌肽Stomoxyn基因分别克隆至载体pUC57中,并通过不同的双酶切组合获得启动子和抗菌肽基因。随后,利用T4连接酶分别将启动子和抗菌肽基因先后插入pNZ8048质粒中,挑选阳性克隆进行验证,并使用电转法构建重组乳酸乳球菌。氯化钠诱导表达后,对菌体蛋白进行了Tricine-SDS-PAGE分析和Western blot分析。最后通过最小抑菌浓度检测重组肽的抑菌效果。结果表明:成功构建空载乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8048-CIP和重组乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8048-CIP-Stomoxyn。在氯化钠诱导下,乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8048-CIP-Stomoxyn胞内成功表达重组Stomoxyn(rStomoxyn)蛋白,分子质量约为5.3 ku。在0.4 mol/L NaCl诱导6 h后,rStomoxyn达到最高水平24μg/L。rStomoxyn对革兰氏阴性菌具有更强的抑菌活性。本研...