本试验旨在研究体外热应激处理对仔猪睾丸组织miRNAs表达谱的影响。试验选用1月龄长白猪6只，随机分为常温对照组（CA）和热应激试验组（HA），每组各3只。仔猪处死后采集睾丸组织，CA组和HA组睾丸组织分别在37℃和42℃的细胞培养箱中培养，处理24 h后收集样品，利用深度测序技术分析2组miRNAs差异表达谱，进行GO和KEGG分析。通过miRNA测序共筛选了47个差异表达miRNAs，其中有39个显著下调和8个显著上调（P<0.05）；对2组间表达差异的miRNA靶基因进行GO分析发现其极显著富集在内质网、细胞溶质、细胞质等功能上（P<0.01）;KEGG分析显示其极显著富集在过氧化物酶体通路、糖酵解/糖异生、萜类主链生物合成、氧化磷酸化、谷胱甘肽代谢、趋化因子介导信号等通路的代谢过程（P<0.01）。可见，热应激可以改变仔猪睾丸组织miRNAs表达谱，进而影响相关生物过程、分子功能、细胞成分和代谢通路，研究结果为深入了解热应激对仔猪睾丸组织的影响、阐明热应激导致仔猪生殖性能紊乱的机制提供新见解。