VI型胶原蛋白α1链（Collagen Type VI Alpha 1 Chain，COL6A1）是胶原蛋白家族中的一个亚型，对乳腺细胞外基质的结构和功能具有重要作用，然而目前尚无绵羊COL6A1基因的核苷酸序列变异特征及其对泌乳性状影响的研究。本研究采用逆转录PCR（Reverse Transcription PCR，RT-PCR）、实时荧光定量PCR（Real Time Quantitative PCR，RT-qPCR）、竞争性等位基因特异性PCR（Kompetitive Allele-SpecificPCR，KASP）和生物信息学方法，克隆绵羊COL6A1基因的完整CDS区，检测其在不同组织中的表达量，并对重要SNPs进行分型，最后分析该基因核苷酸序列变异对绵羊泌乳性状的影响。绵羊COL6A1基因CDS区全长为3 084 bp，编码1 027个氨基酸。RT-qPCR结果表明，COL6A1基因呈现出组织特异性表达，它在乳腺组织中的表达量最高，而在肝脏中的表达量最低。COL6A1蛋白质的二级结构主要以无规则卷曲为主。KEGG分析结果表明，COL6A1基因主要注释到PI3K-Akt、ECM受体交互、细胞黏附、蛋白质消化和吸收等信号通路中。String分析结果表明，COL6A1可与COL5A1、COL3A1及整合素亚基α1（Integrin Alpha 1，ITGA1）、整合素亚基α11（Integrin Alpha 1，ITGA11）和整合素亚基β5（Integrin Beta 5，ITGB5）等蛋白交互发挥作用。应用Sanger测序和KASP分型技术，在绵羊COL6A1基因第35外显子区域发现1处c.2850G>A的同义突变，由AA、GG和AG 3种基因型构成。相关性分析结果表明，GG基因型个体的乳蛋白率较AA型个体提高了0.14%（P<0.05），而AG型个体的乳脂率较AA型个体提高了0.25%（P<0.05）。该结果为深入研究COL6A1基因对绵羊泌乳性能的生物学影响提供了基础数据。